电泳样品缓冲液是进行蛋白质或核酸电泳分析时的重要试剂,其配制需严格按照比例和步骤进行。
电泳样品缓冲液是进行蛋白质或核酸电泳分析时的重要试剂,其主要成分包括Tris-HCl缓冲液、甘油、SDS(十二烷基硫酸钠)、DTT(二硫苏糖醇)等。以下为电泳样品缓冲液的配制方法:
1. 准备所需试剂:Tris-HCl缓冲液(pH 6.8)、甘油、SDS、DTT、双蒸水。
2. 称取10g SDS,加入50mL双蒸水,充分溶解。
3. 称取2.5g DTT,加入50mL双蒸水,充分溶解。
4. 称取10g Tris-HCl,加入50mL双蒸水,充分溶解。
5. 将溶解好的SDS、DTT和Tris-HCl溶液混合,搅拌均匀。
6. 加入900mL双蒸水,搅拌均匀。
7. 最后加入甘油,使甘油浓度为10%(V/V)。
8. 将混合液转移至1L容量瓶中,用双蒸水定容至1L。
9. 将配制好的电泳样品缓冲液置于4℃冰箱中保存。
电泳样品缓冲液在配制过程中,应注意以下几点:
1. 试剂需新鲜配制,避免长时间存放导致质量下降。
2. 称取试剂时,应尽量使用精密天平,保证称量准确。
3. 配制过程中,尽量避免气泡产生,以免影响电泳效果。
4. 电泳样品缓冲液在使用前,应充分搅拌均匀。
1. 电泳样品缓冲液中的SDS具有使蛋白质变性、断裂的作用,有利于蛋白质在电泳过程中的分离。
2. 甘油在电泳样品缓冲液中起到稳定蛋白质结构的作用,有助于提高电泳效果。
3. DTT在电泳样品缓冲液中起到还原剂的作用,有助于消除蛋白质中的二硫键,使蛋白质更容易变性。